摘要：Nα-芴甲氧羰基-Nδ-叔丁氧羰基-L-鸟氨酰甘氨酸(Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH)是宫缩阻碍剂阿托西班的短肽片断，通过液投合成法高效合成高纯度的Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH片断不错有用镌汰阿托西班的合成资本。继承液投合陈顺序，以N-羟基-5-降龙脑烯-2，3-二甲酰亚胺(HONB)活化Nα-芴甲氧羰基-Nδ-叔丁氧羰基-L-鸟氨酸(Fmoc-L-Orn(Boc)-OH)的羧基高效合成Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH，并对响应物料配比和响应溶剂体系进行了策划，得回了最优的Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH合成工艺，该工艺操作浅易、资本低且产物纯度高，可用于工业化坐褥。

关 键 词：阿托西班; Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH; 多肽片断; 合成工艺; 液投合成

阿托西班(Atosiban)是一种宫缩阻碍剂，具有阻碍宫缩成果好、反作用小和长疗程诓骗等上风。阿托西班不错与子宫平滑肌细胞膜上的缩宫素受体进行竞争，从而阻碍由缩宫素激勉的子宫缩小，并使环状肽催产素介导的前哨腺素分泌减少，达到保胎的目标[1-9]。该阻碍剂适用于18岁以上、孕龄24～33 w和胎儿心率平时的妊妇。

现在阿托西班主要继承固投合成法来合成，国表里专利和文件[10-14]报说念了从C端(羧基)至N端(氨基)一一氨基酸偶结合成阿托西班主肽链多肽序列的固投合陈顺序，每一个氨基酸的引入触及偶联和脱除-Fmoc保护基，操作繁琐，存在氨基酸消旋、氨基酸异构和氨基酸缺失(生成缺损肽或不完好肽)等风险。

片断合成是将氨基酸通过液投合成或固投合成建构2个或多个氨基酸寡肽的顺序。单个氨基酸的侧链官能团不错保护或未保护，从而得回最大保护、部分保护或最小保护的多肽片断。片断合成能克服多肽合成中某些固有问题，如克服某些多肽容易发生的二酮哌嗪(diketopiperazine， DKP)响应[15]、3-哌嗪基丙氨酸(3-(1-piperidinyl)analine)酿成响应和异天冬氨酸生成响应等固有问题。此外，由于继承片断合成计谋，减少了多肽的合成身手，因而不错减少Fmoc不全王人脱除引起的氨基酸缺失以及氨基酸消旋的风险。张颖等[16]报说念了用五肽片断NH2-Asn-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-NH2和四肽片断Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-Ile-Thr(tBu)-OH偶结合成阿托西班的液投合陈顺序，该顺序操作便捷，贬责了Boc计谋液投合陈顺序中苄基脱除条目尖刻的问题，不需树脂、超量保护氨基酸、缩合剂、洗涤溶剂及稀疏坐褥缔造，资本低，易于已毕大范围化坐褥。冯文化[17]等报说念了一种阿托西班片断H-Ile-Thr(Bzl)-Asn-Cys(Bzl)-Pro-OH的液投合陈顺序，较固投合成法资本更低，更易于工业化坐褥。

鉴于片断合成的上风，若是能事先合成阿托西班主肽链多肽序列中相应的短肽片断，通过短肽片断的偶联来合成多肽序列就能克服上述多肽合成风险。徐红岩[12]、董华建[13]和吕金芹[18]等报说念了固投合成Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-树脂后进一步合成阿托西班的顺序，其中徐红岩和吕金芹等报说念的从C端(羧基)至N端(氨基)一一氨基酸偶结合成阿托西班的合陈顺序总收率分袂为7.5%、25.6%;董华建等报说念的事先合成Mpa(R)-D-Tyr(Et)-OH后与其他片断偶结合成阿托西班的合陈顺序总收率约61.1%，不错看出短肽片断法不错有用栽植多肽的合成收率。然而Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH片断的液投合陈顺序于今莫得文件报说念，因此通过液投合成法高效合成Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH是一个很有趣味趣味且急需要贬责的时候问题。

本文继承HONB为偶联试剂合成Fmoc-L-Orn(Boc)-ONB，响应液经过浅易的过滤平直进入下一步响应，缩合合成得回了高纯度的Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH(图1)，将其用于阿托西班的固投合成，不错有用镌汰阿托西班的合成资本。

图1 Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH的合成道路

1.1 Fmoc-L-Orn(Boc)-ONB的合成

在500 mL响应瓶中循序加入0.100 mol Fmoc-L-Orn(Boc)-OH、0.120 mol HONB、200 mL二氯甲烷，搅动溶清，适度温度在0 ℃以下，在搅动下以5 d/s的速度加入0.12 mol DIC，室温搅动响应，TLC追踪响应经由，张开剂为氯仿∶甲醇∶乙酸=10.0∶1.0∶0.1(V∶V∶V)。响应收尾后(约4 h)，抽滤，聚集滤液，减压浓缩，得油状液体中间体Fmoc-L-Orn(Boc)-ONB，备用。

1.2 Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH的合成

在1000 mL响应瓶中循序加入0.120 mol H-Gly-OH、0.144 mol碳酸钠、300 mL H2O，搅动溶清，随后循序加入50 mL THF、150mL C2H5OH，搅动均匀。将得回的油状液体中间体Fmoc-L-Orn(Boc)-ONB溶于100 mL THF中，以5 d/s的速度加入到响应体系中，快速搅动，用Na2CO3看护响应体系pH=8～9，适度温度为20～25 ℃。TLC追踪响应经由，张开剂为乙酸乙酯∶石油醚=1∶1(V∶V)。响应收尾后(3～4 h)，加入乙酸乙酯/石油醚萃取杂质2次(萃取剂:50 mL乙酸乙酯和100 mL石油醚)，聚集水层，用浓盐酸调体系pH=4～5，加入300 mL乙酸乙酯萃取产物，聚集乙酸乙酯层，用5%盐水萃洗(2×300 mL)，乙酸乙酯层用30 g无水硫酸钠干燥，2 h后过滤，聚集滤液，减压浓缩至1/3体积，加入300 mL石油醚，搅动结晶4 h，过滤聚集固体，得回43.6 g Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH，收率为85.3%。

1H NMR δ: 8.14(t， 1H)， 7.88(d， J=8 Hz， 2H)， 7.75～7.72(m，2H)， 7.49(d， J=8 Hz， 1H)， 7.42(t， 2H)， 7.33(t， 2H)， 6.78(t， 3H)， 4.29～4.23(m， 2H)， 4.22～4.20(m， 1H)， 4.06～4.00(m， 1H)， 3.83～3.70(m， 2H)， 2.95～2.87(m， 2H)， 1.71～1.42(m， 4H)， 1.38(s，9H); 13C NMR δ: 172.76， 171.59， 156.44， 156.08， 144.38， 144.23， 141.17， 128.10， 127.55， 125.83， 120.57， 77.90， 66.13， 54.56， 47.13， 41.12， 29.76， 28.74， 26.57; HR-MS calcd for C27H33N3O7{[M+H]+}512.2391， found 511.2393 calcd {[M+Na]+} 534.2211， found 534.2213; HPLC 99.76%，单个最大杂质为0.09%。

ROMAN[19]等报说念了Fmoc-Ala-OH与H-Ala-OtBu偶结合成Fmoc-Ala-Ala-OtBu、再脱除-OtBu保护基合成Fmoc-Ala-Ala-OH的最大保护法，该顺序由于需要先合成H-Ala-OtBu，再脱除-OtBu保护基，是以合成道路较长，导致合成资本偏高。KATRITZKY[20]等报说念了继承1H-苯并三唑(HBt)将Fmoc-Ala-OH活化为Fmoc-Ala-Bt后与H-Cys-OH在碱性水溶液中偶联为Fmoc-Ala-Cys-OH的最小保护法，由于中间体Fmoc-Ala-Bt不自如且不易结晶，因此难以合成得回高纯度的短肽。若将Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH的合成继承最大保护法，不错沟通将H-Gly-OH转动为H-Gly-OR(R=Me， Et和tBu)后与Fmoc-L-Orn(Boc)-OH进行偶结合成Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OR，再脱除-R基团来合成Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH。但在碱性疏忽酸性条目下脱除-R基团时会导致Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OR分子结构中对碱不自如的-Fmoc基团疏忽对酸不自如的-Boc基团的脱除，因此继承最大保护法不仅合成道路长，还有可能无法得回策画分子Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH。而若是将Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH的合成继承最小保护法，不错沟通继承活化剂(HBt、HOBt、HOAt、HOSu、HONB、HATU和HBTU)活化Fmoc-L-Orn(Boc)-OH的羧基后与H-Gly-OH在碱性水溶液中偶联为Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH。

HBt、HOBt和HOSu等活化剂活化Fmoc-L-Orn(Boc)-OH得回的中间体王人不自如，而HOAt、HATU和HBTU等活化剂价钱勤恳，因而也不是最好的选拔。然而HONB具有价钱低廉，活化Fmoc-L-Orn(Boc)-OH后得回的中间体自如等上风，因而是合成Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH的最好活化剂，该活化剂不仅使合成道路短，还能合成高纯度的产物。因此，本文以HONB为活化剂，高效合成了高纯度的Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH。策画产物的分子结构通过1H NMR、13C NMR和HR-MS等波谱数据进行了阐发，策画产物的HPLC纯度高达99.76%，单个最大杂质为0.09%，全王人达到用于阿托西班合成的质地要求。本文探究了不同的响应物物料配比以及溶剂体系对策画产物Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH的纯度与收率的影响，本质数据如表1所示。

表1 Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH的其它合成本质闭幕

从表1不错看出，当物料Fmoc-L-Orn(Boc)-OH、HONB、DIC和H-Gly-OH的物资的量配比为1.0∶1.2∶1.2∶1.2，溶剂体系为THF/C2H5OH/H2O时，产物纯度和收率王人较高，且资本最低，况且放大响应收率优秀，产物纯度极好。通过使用2种互溶的水溶性溶剂(THF和C2H5OH)与水的夹杂响应体系，使合成得回的产物纯度更高，本文臆测其原因在于Fmoc-L-Orn(Boc)-ONB融解在THF中，H-Gly-ONa融解在水中，加入酒精后2个响应物更容易战役并发生响应;酒精可能阐发了2个作用，率先加多了H-Gly-OH在有机溶剂中与Fmoc-L-Orn(Boc)-ONB的战役，从而加速响应速度，PU[21]等也报说念了缩合响应体系中加入酒精会加多响应速度。其次，酒精有用阻碍了Fmoc-L-Orn(Boc)-ONB在碱水体系中的瓦解，从而镌汰了杂质Fmoc-L-Orn(Boc)-OH的生成。

本文在优化的合成工艺条目下，继承水溶性的H-Gly-ONa与Fmoc-L-Orn(Boc)-ONB平直在夹杂溶剂中响应的顺序，高效合成了策画分子;通过浅易的纯化顺序，合成了高纯度的Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH，产物闭幕得回波谱数据的阐发。该工艺操作浅易、合成资本低且产物纯度高，可用于工业化坐褥。合成的Fmoc-L-Orn(Boc)-Gly-OH可进一步用于阿托西班的固投合成，有望镌汰阿托西班的合成资本。

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